[식품공전] 리스테리아 모노사이토제네스 미생물시험법(Listeria monocytogenes)

안녕하세요 호선생입니다.

식품공전 미생물시험법
리스테리아 모노사이토제네스 (Listeria monocytogenes) 시험법을 정리해볼까 합니다.

보시는 시기에 따라 새로운 시험법이 추가됐을 수 있으니,
참고용으로 봐주시면 감사하겠습니다 :)

 

리스테리아 모노사이토제네스 (Listeria monocytogenes)

 

*증균배양
1. 가공식품 및 수산물
검체 25 g 또는 25 mL를 225 mL의 Listeria 증균배지를 가한 후, 증균배양
(30℃, 48 h)

❗배양 온도 체크하기 (30℃)


2. 유가공품, 식육가공품,
알가공품, 식육 및 가금류
검체 25 g 또는 25 mL를 225 mL의 Listeria증균배지 (LEB) PALCAM Broth 또는
UVM-modified Listeria증균배지를 가한 후, 증균배양
(30℃, 24±2 h)

위의 배양액 0.1 ml을 10ml의 Fraser broth에 접종하여 2차 증균배양
(35~37℃, 24~48 h)

❗Fraser Listeria Broth
배지 내의 Escullin이 Listeria의 Esculinase에 의해 Esculetin으로 변환 후,
배지의 Ferric ion과 결합하여 검음 색으로 변함

 

검체를 넣지않은 동일 증균배지를 대조시험액(블랭크)으로 시험조작의 무균여부를 확인

 

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*분리배양
증균배양액을 Oxford Agar 또는 LPM Agar 또는 PALCAM Agar 또는 ALOA Agar에 접종하여 배양
(35~37℃, 24～48 h)

❗Oxford agar, PALCAM Agar
Escullin성분이 포함되어 있어 Fraser Listeria Broth와 동일한 검은색 환이 발생함


의심집락이 확인되면 0.6% yeast extract + Tryptic soy Agar에 접종 후, 배양
(30℃, 24～48 h)

 

*성상
Oxford Agar: 진한갈색 또는 검은색 환을 가지는 집락
PALCAM Agar: 진한갈색 또는 검은색 환을 가지는 집락
ALOA Agar: 혼탁한 환을 가지는 청록색 집락
LPM Agar: 회색 또는 크림색 집락

 

(왼쪽)Oxford Agar, (오른쪽)ALOA Agar에서 Listeria monocytogenes 성상

*확인시험
step 1.
그람염색을 진행하여, 그람양성 간균을 확인


step 2.
hemolysis(용혈성), motility(운동성),
catalase, CAMP test, 당분해시험
(mannitol, rhamnose, xylose)을 실시


당분해 시험은 보통 API로 진행합니다.

 

 

*성상
hemolysis(용혈성): β-hemolysis

β-hemolysis

 

motility(운동성): 양성
운동성은버섯모양으로 나타나는 경우가 많습니다

motility

 

catalase: 양성

catalase

CAMP test:
S. aureus(ATCC 25923)는 양성,
R. equi(ATCC 6939)는 음성
양성의 경우,
면봉 또는 화살표 모양의 용혈대가 나타납니다

 CAMP test

당분해시험
(mannitol, rhamnose, xylose):
mannitol 비분해 / rhamnose 분해 / xylose 비분해

API Lis로 대체하여 진행하는 경우가 많습니다.

 API Lis

API Lis 결과

 

리스테리아 시험법은 다른 식중독균에 비해, 증균배양의 조건이나 식품과 축산물을
구분하여 시험을 진행해야하기 때문에 어려워하시는 분들이 많은 시험법이라고 생각됩니다.

 

또한 확인시험의 결과와 API의 결과가 명쾌하게 나오지 않는 경우가 많으니,
더 힘든 거 같아요...

다른 시험법도 보고 가세요 :)

 

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