[식품공전] 클로스트리디움 퍼프린젠스 미생물시험법 (Clostridium perfringens)

안녕하세요 호선생입니다.

 

식품공전 미생물시험법
클로스트리디움 퍼프린젠스 (Clostridium perfringens) 정성 시험법을 정리해볼까 합니다.

 
보시는 시기에 따라 새로운 시험법이 추가됐을 수 있으니, 
참고용으로 봐주시면 감사하겠습니다 :)

 
클로스트리디움 퍼프린젠스 (Clostridium perfringens)
C. perfringens

 

*증균배양
시험용액 1 mL를 Cooked Meat 배지(CM)의 아랫부분에 접종하여 혐기배양
(35～37℃, 18～24 h)

 

시험용액을 가하지 않은 동일 희석액 1 mL를 대조시험액 (블랭크)으로 시험조작의
무균여부를 확인한다

 

 

*분리배양
난황첨가 Clostridium perfringens Agar (+카나마이신 200 μg/mL)
또는 난황첨가 TSC Agar에 증균배양액을 접종하여 혐기배양
(35～37℃, 18～24 h)

 

*성상
Clostridium perfringens Agar:
주변에 불투명한 백색환이 있는 유황색 집락

난황첨가 TSC Agar:
불투명한 환을 가지는 황회색 집락

난황첨가 TSC Agar에서 C. per 성상

*확인시험
step 1.
성상의 집락을 2장의 보통한천배지 (NA)에 옮겨서 호기와 혐기조건으로 각각 배양한다.
(35～37℃, 18～24 h)

 

*성상
NA(혐기): 집락발육

NA(호기): 집락 비발육

 

 

step 2.
2-1
그람염색을 진행하며, 그람양성간균을 확인하고,

2-2
GAM 배지에 접종 후, 혐기배양하여 운동성 확인
(35∼37℃, 24～48 h)

2-3
1% glucose, lactose, inositol, raffinose가 각각 첨가된 4종의 GAM 배지에
3일간 혐기배양하여 당분해능 확인
(35∼37℃, 72 h)

 

*성상
그람염색: 그람양성간균

 Clostridium perfringens _ Gram염색 성상

운동성 (GAM): 음성(운동성 없음) 

Clostridium perfringens _ GAM, 운동성 성상

1%당분해능:
BTB-MR지시약 첨가
Glu = 양성 (붉은색)
Lac = 양성 (붉은색)
Ino = 양성 (붉은색)
Raf = 양성 (붉은색)

Clostridium perfringens _ 1% 당분해능 성상

 

step 3.
난황첨가 TSC Agar에  접종 후, 혐기배양하여 Lecithinase억제여부 확인
(35∼37℃, 24 h)

 

 

*성상
Lecithinase억제시험: 2～4 mm의 불투명한 환을 가지는 황회색 집락

 Clostridium perfringens _ Lecithinase억제시험 성상

 

C. perfringens 시험법은 확인시험의 단계와 준비할 배지도 많은 편이지만,
step마다 배양시간이 달라서 익숙해지기 전까지는 헷갈리기 쉬운 시험법 같습니다.

 

그리고 다른 식중독균과 다른 점으로는 생화학 test를  실시하라고 명시되어있지않습니다

하지만, 당분해능력이 명확하게 양성이 나오지않을때는 생화학 test를 진행해보시면 의외로
C. perfringens 양성이 나올때가 있습니다.

* 참고자료
  API 20A

Clostridium perfringens _ API 20A Kit

Clostridium perfringens _ API 20A 리딩

 

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